教你如何同时鉴别和定量耐甲氧西林金黄色葡

还记得来自Nature的伦敦音吗?转成正宗曼德瑞,教你如何同时鉴别和定量耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。

北京时间年10月24日来自英国伦敦LGC的丹尼斯·奥沙利文,在全球范围内分享了她所在的分子与细胞生物学团队通过Naicacrystal数字PCR仪的三色检测通道,成功地在一次反应中达到了鉴别MRSA和对其携带抗性基因进行定量的研究,从而区分了MRSA和与其形态学类似的表皮葡萄球菌。在年第一个工作日,小编将实验的研究背景、实验思路以及结果和重复性进行简明阐述。

研究背景

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌,自从上世纪40年代青霉素问世后,金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大的控制。但随着青霉素的广泛使用,有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶,能水解β-内酰胺环,表现为对青霉素的耐药。科学家研究出一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素,即甲氧西林(methicillin)。

年应用于临床后曾有效地控制了金黄色葡萄球菌产酶株的感染,可英国的Jevons就首次发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),MRSA从发现至今感染几乎遍及全球,已成为院内和社区感染的重要病原菌之一。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是一种对多种抗生素耐药的细菌葡萄球菌,MRSA可引起各种问题,从皮肤感染和败血症到肺炎到血流感染。

实验设计

?设计三色探针

Target-1蓝色,检测抗性基因

Target-2绿色,检测金黄色葡萄球菌

Target-3红色,检测表皮葡萄菌

?检测出四种不同的葡萄球菌

1、MRAS-抗菌素抗性

2、MSSA-抗菌素敏感

3、MRSE-抗菌素抗性

4、MSSE-抗菌素敏感

结果、特异性和重复性

?通过MRSA-抗菌素抗性金黄色葡萄球菌测试探针

Target1-蓝色,检测抗性基因

Target2-绿色,检测金黄色葡萄球菌

?结果:双色探针相互无干扰,且在红色通道无渗透

?通过不同浓度样本的三色定量结果可以得出结论,该方法可以:

准确的区分MRSA和MRSE

实现对不同浓度的MRSA定量检测

实现对不同浓度的MRSE定量检测

MRSA-抗菌素抗性金黄色葡萄球菌↑

MRSE-抗菌素抗性表皮葡萄菌↑

从上述结果可以得出结论:通过三个特异性的探针识别出两类形态相近的葡萄球菌,并根据抗性基因进行抗性分析和定量,相较于传统的培养方法,结果特异性、重复性好,获得结果更为快速。同时Naicacrystal数字PCR系统的自动集成化程度,确保该方法降低人为干扰,实现方法的流程化和标准化。

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